Avaliaram-se in vitro as respostas das citocinas Tipo 1 e Tipo 2 de dadores portugueses saudáveis vacinados à nascença com BCG, com Mantoux positivo (induração≥5mm) e de doentes com tuberculose pulmonar (TP). Foi efectuado o estudo por ELISA da produção de IFN-γ e IL-5 por Células Mononucleares do Sangue Periférico (CMSP) dos dadores após estimulação com M. tuberculosis e antigénio solúvel PPD. Foi confirmada a presença intracelular de IFN-γ e de IL-4 em subpopulações de células T por análise multiparamétrica, em citometria de fluxo. As CMSP dos doentes com tuberculose estimuladas com PPD e M. tuberculosis demonstraram uma diminuição na produção de IFN-γ sem aumento da produção de IL-5 em resposta ao painel de antigénios. Nos doentes com tuberculose observou-se uma frequência diminuída de IFN-γ intracelular nas células T CD4+ e CD8+, em comparação com os grupos controlos. Após estimulação das CMSP com M. tuberculosis, os doentes demonstraram um aumento médio de IL-4 intracelular no fenótipo T CD4+, mais evidente na subpopulação T CD8+. O aumento da secreção de IL-4 nos doentes com tuberculose verificou-se sobretudo nos indivíduos em estado avançado da doença. Os resultados obtidos por Citometria de Fluxo contradizem de alguma forma os obtidos por ELISA. A secreção de IL-4 intracelular representa uma medida mais sensível da produção de citocinas tipo 2 do que a quantificação de IL-5 por técnicas de ELISA. Estes novos resultados sugerem que pode ocorrer uma mudança de T 1 para T 2 em doentes com tuberculose em estado avançado.

REV PORT PNEUMOL 2001; VII (2):

In vitro Type 1 and Type 2 cytokine responses were assessed in healthy Portuguese donors who were BGC vaccinated at birth and Mantoux positive (induration 5≥mm) and pulmonary tuberculosis patients (TB). We evaluated the production of IFN-γ and IL-5, after PBMC from donors were stimulated with live M. tuberculosis H37Rv and the soluble antigen PPD, by standard ELISA techniques. These studies were extended to confirm intracellular presence of IFN-γ and IL-4 in specific T cell subsets by multi-parameter flow cytometry. PBMC from tuberculosis patients demonstrated significantly reduced amounts of IFN-γ when stimulated with PPD and M. tuberculosis, with no increase in IL-5 production towards all the antigens, when compared to the control group. Intracellular staining for IFN-γ in tuberculosis patients showed reduced frequencies of CD4+ and CD8+ T cell intracellular IFN-γ in comparison to healthy subjects. Tuberculosis patients demonstrated a mean increase of intracellular IL-4 after PBMC were stimulated with M. tuberculosis in the CD4+ phenotype, but more notably in the CD8+ subset. The increased secretion of IL-4 in tuberculosis patients was primarily in individuals with an advanced clinical form of the disease. Interestingly the findings using flow cytometry techniques somewhat contradicts the results obtained by ELISA. Intracellular IL-4 secretion is therefore a more sensitive measure of Type 2 cytokine production than quantitation of IL-5 by ELISA. These results suggest that a type 1 switch to a type 2 can occur, in patients with tuberculosis in an advanced stage.

REV PORT PNEUMOL 2001; VII (2):